《生化危机5》承袭《生化危机4》所奠定的全3D绘图第三称背后视点动作冒险系统，并配合次世代平台加以强化，营造出更为逼真写实的游戏画面与更具压迫感的战斗场面。并以光天化日场景下，日照处与日阴处激烈的明暗变化，来营造高度反差的未知恐惧感。
游戏以非洲大陆为舞台，克里斯将深入非洲村落，使用枪砲与搏击术来对抗蜂拥而至的狂暴村民。正常村民被强迫吞食寄生虫而狂暴化的场面，以及狂暴村民口中或头部冒出的寄生虫触手，可知游戏将採用类似4代的寄牲兽生化危机设定。
另外，出现了新登场的神秘黑人女性角色，具备剽悍身手的她，虽然体格不如克里斯般强壮，不过仍有办法在狂暴村民的威胁下自保，并与克里斯搭挡联手作战。